上海金穗生物科技有限公司

透析已成为生物化学实验室简便常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
    透析只需要使用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
    透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度，通常是4℃透析，升高温度可加快透析速度。
   透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的多的还是用纤维素（再生纤维素RC、纤维素酯CE、PVDF等）制成的透析膜，目前常用的是美国美国光谱医学公司spectrum和美国unio Carbide联合碳化物公司，各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的分子量，缩写为MwCO）大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类，单位为道尔顿（D）。
    商品透析袋制成管状，其扁平宽度为8 mm～77 mm不等。为防干裂，出厂时都用10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。
    1.将透析袋剪成适当长度（10-20cm）的小段，即成透析袋。
    2.在大体积的2%（m/v)碳酸氢钠和1mmol/LEDTA(PH=8)中将透析袋煮沸10min。
    3.将透析袋用蒸馏水彻底漂洗。
    4.将透析袋置1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min。
    5.透析袋冷却后存放于4度，应确保透析袋始终浸没在液体中。
注：从此步起用透析袋时一定要戴手套操作。
    6.在使用之前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗。
    注：也可以将透析袋放在广口瓶中充满水，松动瓶盖，于20psi（1.40kg/cm2)高压灭菌10min，代替第四步用1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min的操作。
    使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中，若长时间不用，可加少量NaN2，以防长菌。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口，用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。
新透析袋如不作如上的特殊处理，则可用沸水煮五至十分钟，再用蒸馏水洗净，即可使用。
    美国美国光谱医学公司生产的透析袋大部分是预处理过的，即用型，使用前只需用蒸馏水冲洗即可使用，spectra/por7系列和生物技术级的透析袋基本不含硫化物和重金属离子。
    使用时，一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可以使用特制的透析袋夹夹紧，由另一端灌满水，用手指稍加压，检查不漏，方可装入待透析液，通常要留三分之一至一半的空间，以防透析过程中，透析的小分子量较大时，袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时，体积增加50％是正常的。为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些，可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析，可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。
    检查透析效果的方法是：用1％BaCl2检查(NH4)2SO4，用1％AgNO3 检查NaCl、KCl等。
    为了提高透析效率，还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国美国光谱医学公司生产的各种型号的透析设备，由于使用对流透析的原理，使透析速度和效率大大提高。
选用透析袋需要知道目的物质的分子量，每次处理的样品量，同一批次的平行试验，是否需要保持目的物质的活性来选择
 
正确选择透析膜
 
 
透析成功进行的关键是在适当的条件下选用的膜。选择时可参照下列六步：
 
·根据目的选择膜的等级（生物技术或标准）
·根据溶液的化学特性选择膜材质（CE、RC）—参见化学相容性表格
·根据使用方法选择产品类型（管状、即用型）
·根据溶质分子量在18种MWCO中选择
·根据处理量在多种尺寸（即用型透析装置）或多种宽度（管状）中选择
·根据目的选择膜预处理方式
 
关键的选择
 
正确选择合适的截留分子量
 
截留分子量的选择是以预留在膜内的大分子的分子量和将要被除去的小分子污染物的分子量为基础的。使用Spectra/Por？膜时，为达到合理有效的分离，需分离的两种物质分子量的比率至少为25。
选择残留分子量的经验法则：选择截留分子量值约为要保留的大分子分子量的一半，以获得至少90%的保留率。
 
膜的化学相容性表格
 
化学相容性表格主要用作使用指导，不作为化学相容性的保证。温度，浓度，长时间曝光等因素的改变可能影响产品的使用。建议您自设条件进行测试。
 
正确选择扁平宽度
 
透析管扁平宽度的选择取决于样品的体积和透析容量。较小的透析管透析更快；较大的透析管因扩散距离较长透析较慢。为易于使用，建议使用总长（包括闭合夹和顶部空间）为大约10—15厘米的膜管。
目录和包装标签都提供“体积/长度”的比例（ml/cm），供您在选择时参考。